Tahadhari kwa ajili ya polyacrylamide gel electrophoresis

· polyacrylamidegel lazima kwa monoma acrylamide, upolimishaji kuanzia nyenzo, kichocheo, na haki ya chumvi na mchanganyiko bafa pamoja.

· akrilamidena BIS (N, N '- methylene double acrylamide) ni matrix ya gel ya fomu ya monoma.

· ammoniamu persulfate kuanza adhesive upolimishaji mchakato. Uundaji wa gundi unahitaji 10% ya suluhisho la ammoniamu ya sulfate iliyoandaliwa katika maji. Habari nyingi zilionyesha hitaji la matumizi amilifu. Walakini, suluhisho la 10% linaweza kuwekwa kwa 4 ℃ kwa wiki kadhaa bila upotezaji mkubwa wa shughuli. Fanya hadi 10 ml na uondoe wakati gundi inashindwa kuunganisha.

Kidokezo: Asilimia yaakrilamidekatika mlolongo wa gundi na gundi ya protini si sawa. Iwapo unatumia acrylamide iliyotayarishwa awali: Suluhisho la BIS, hakikisha umepata chupa sahihi.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) ni kichocheo, katika chupa ya kahawia, iliyowekwa kwenye jokofu. Ongeza tu kabla ya kumwaga gundi.

· Polyacrylamide electrophoresis kutumika kioo katika electrophoresis lazima kuoshwa kabla na baada ya kila wakati. Baada ya electrophoresis, safisha kwa brashi laini na kitambaa katika maji ya moto ya sabuni, suuza na maji yaliyotengenezwa na kusimama ili kukauka.

· unyevu na vumbi vinaweza kusababisha kwa polima tupu. Kabla ya electrophoresis, safi sahani ya kioo na kioo safi na kuifuta kwa brashi laini. Osha na maji distilled na kavu vizuri na karatasi kuifuta. Kuosha na ethanol 70% kabla ya kufuta kwa karatasi husaidia kusafisha na kuharakisha kukausha. Ongeza sampuli za acrylamide mfululizo: BIS, maji, suluhisho la bafa, ammoniamu persulfate, TEMED. Shake vizuri na kumwaga mara moja.

Si lazima degass Polyacrylamide kabla ya upolimishaji. (Acrylamide iliwekwa kwenye utupu ili kuondoa viputo kwa sababu oksijeni huzuia upolimishaji.)

Vidokezo vya sampuli ya pointi ya gundi ya usawa.

· weka kipande cha karatasi nyeusi kwenye kisanduku cha chini, usuli mweusi kutengeneza shimo la sampuli ili kuona kwa uwazi zaidi.
· gundi tank iliyojaa bafa, juu kidogo ya colloid.
· ikiwa ukingo una mwanga, washa taa, acha mwanga uangaze colloid. Chora sampuli kwenye pipette.
· kutumia kifaa cha kupitishia bomba kiotomatiki.
· katika 10-200 mu 1 kioevu cha kusogea kinaweza kutumika katika alama nyingi kwenye sampuli. Kwa mashimo madogo sana ya sampuli (chini ya 10μ1), kichwa cha muda mrefu cha pipette kinachotumiwa kwa gundi ya mpangilio ni rahisi zaidi.

· kupiga bomba kwa kuzamishwa tu kwenye sampuli, kuvuta maji yanayosonga polepole. Sampuli inaweza kuonekana kuwa nata na glycerini, na kusukuma kwa haraka kunaweza kuteka Bubbles za hewa kwenye kichwa cha pipette.

· Sampuli baada ya kuvuta pumzi ya kichwa cha bomba, itasogeza kichwa cha maji kwa upole kwenye ukingo wa bomba au karatasi ya kufuta itanyonya kichwa kioevu nje ya matone. Kuwa mwangalifu usinyonye sampuli.

Weka sampuli kwenye shimo la sampuli

· kifaa cha bomba kuweka shinikizo kidogo, fanya sampuli zisogeze kidogo kichwa cha kioevu.
· kichwa cha bomba kilichoingizwa kwenye bafa, juu kidogo kuliko mashimo ya doa, kudumisha shinikizo chanya. Ncha ya pipette inaweza kuingizwa kwenye shimo ndogo.
· polepole na kwa uthabiti sampuli nje. Ncha ya pipette imewekwa juu ya shimo la sampuli ya uhakika, na sampuli itazama ndani ya shimo. Acha sampuli izame ili kujaza shimo la sampuli badala ya kusukuma ndani.
· mara tone la mwisho la sampuli yenye kichwa kioevu, kioevu kitasogea hadi kwenye mguu wa pili, kuinua polepole kusogea kwa kioevu, kutoka kwenye bafa.

Jinsi ya kufanya sampuli ya gundi wima?

· mashimo ya sampuli ya gundi ya wima yaliyoundwa kati ya vipande viwili vya kioo. Katika gundi nyembamba sana, kichwa cha pipette hawezi hata kuingizwa kati ya sahani mbili za kioo. Tazama glycerin! Weka kichwa cha pipette juu ya shimo la sampuli na sampuli itazama ndani ya shimo.
sampuli ya uhakika kabla, hakikisha kuweka hatua wima ya polypropen acyl gel sampuli sampuli shimo ni suuza safi. Osha akrilamidi isiyo na polima na maji ambayo yanaweza kuonekana chini ya shimo la sampuli. Maji yanaweza kufanya shimo la sampuli kuwa ndogo sana. Tumia sindano ya 25ml au 50ml na sindano ya kupima 18. Mimina kwenye bafa ya electrophoresis na uondoe kwa makini shimo la sampuli.
· inaweza kuwa ngumu kuona shimo la sampuli, lakini wakati huo huo, iliyobaki ni rahisi. Ikiwa kuna mashimo ya ziada, bafa ya sampuli inaweza kujaribiwa na bromophenol bluu.