Tahadhari kwa electrophoresis ya polyacrylamide

· PolyacrylamideGel lazima na acrylamide monomer, vifaa vya kuanza upolimishaji, kichocheo, na haki ya mchanganyiko wa chumvi na buffer pamoja.

· Acrylamidena bis (n, n '- methylene mara mbili acrylamide) ni fomu ya monomer gel.

· Ammonium orsulfate kuanza mchakato wa upolimishaji wa wambiso. Uundaji wa gundi unahitaji suluhisho la 10% amoniamu iliyoandaliwa katika maji. Habari nyingi zilionyesha hitaji la matumizi ya kazi. Walakini, suluhisho la 10% linaweza kuwekwa kwa 4 ℃ kwa wiki kadhaa bila upotezaji mkubwa wa shughuli. Tengeneza hadi mililita 10 na utupe wakati gundi inashindwa kuzidisha.

Kidokezo: Asilimia yaAcrylamideKatika mpangilio wa gundi na gundi ya protini sio sawa. Ikiwa unatumia Acrylamide ya Premade: Suluhisho la BIS, hakikisha kupata chupa sahihi.

· Temed (n, n, n ', n'- tetramethyl ethylenediamine) ni kichocheo, kwenye chupa ya kahawia, iliyowekwa kwenye jokofu. Ongeza kabla ya kumwaga gundi.

· Polyacrylamide electrophoresis iliyotumiwa glasi katika electrophoresis inapaswa kuoshwa kabla na baada ya kila wakati. Baada ya electrophoresis, osha na brashi laini na kitambaa kwenye maji ya moto ya sabuni, suuza na maji yaliyotiwa maji na usimame kukauka.

Unyevu na vumbi zinaweza kusababisha na polymer mashimo. Kabla ya electrophoresis, safisha sahani ya glasi na glasi safi na uifuta kwa brashi laini. Osha na maji yaliyosafishwa na kavu kabisa na kufuta karatasi. Kuongezeka na 70% ethanol kabla ya kuifuta na karatasi husaidia kusafisha na kuharakisha kukausha. Ongeza sampuli za acrylamide mfululizo: bis, maji, suluhisho la buffer, amonia ya amonia, temed. Shika vizuri na umimina mara moja.

Sio lazima kuondoa polyacrylamide kabla ya upolimishaji. (Acrylamide ilitumiwa kuwekwa kwenye utupu kuondoa Bubbles kwa sababu oksijeni inazuia upolimishaji.)

Vidokezo vya sampuli ya usawa ya gundi.

· Weka kipande cha karatasi nyeusi kwenye sanduku la chini, msingi mweusi kutengeneza shimo la sampuli kuona wazi zaidi.
· Gundi tank kujazwa buffer, juu ya colloid tu.
· Ikiwa makali yana taa, washa taa, acha taa inang'aa colloid. Chora sampuli ndani ya bomba.
Kutumia kifaa cha bomba moja kwa moja.
· Katika 10-200 MU 1 hatua ya kusonga kioevu inaweza kutumika katika sehemu nyingi kwenye sampuli. Kwa shimo ndogo sana za sampuli (chini ya 10μ1), kichwa kirefu cha bomba kinachotumiwa kwa kufuata gundi ni rahisi zaidi.

· Kuweka bomba tu kwenye sampuli, kuvuta pumzi polepole. Sampuli inaweza kuonekana kuwa nata na glycerin, na kusukuma haraka kunaweza kuteka Bubbles za hewa ndani ya kichwa cha bomba.

· Sampuli baada ya kuvuta pumzi kichwa cha bomba, zitasonga kichwa kwa upole kwenye makali ya bomba au kuifuta karatasi ya kunyonya kichwa cha kioevu nje ya matone. Kuwa mwangalifu usinyonye sampuli.

Weka sampuli kwenye shimo la mfano

· Kifaa cha bomba ili kuweka shinikizo kidogo, fanya sampuli zisonge kidogo kichwa cha kioevu.
· Kichwa cha bomba kilichoingizwa kwenye buffer, juu kidogo kuliko shimo la doa, kudumisha shinikizo nzuri. Ncha ya bomba inaweza kuingizwa kwenye shimo ndogo.
· Polepole na kwa kasi sampuli nje. Ncha ya bomba imewekwa juu ya shimo la sampuli ya uhakika, na sampuli itazama ndani ya shimo. Acha sampuli iweze kujaza shimo la sampuli badala ya kusukuma ndani.
· Mara tu tone la mwisho la sampuli na kichwa cha kioevu, kioevu kitahamia kwenye mguu wa pili, polepole kuinua hoja ya kioevu, ondoka kwa buffer

Jinsi ya kufanya sampuli ya wima ya wima?

· Vertical gundi sampuli shimo sampuli zilizoundwa kati ya vipande viwili vya glasi. Katika gundi nyembamba sana, kichwa cha bomba hakiwezi hata kuingizwa kati ya sahani mbili za glasi. Tazama glycerin! Weka kichwa cha bomba juu ya shimo la mfano na sampuli itazama ndani ya shimo.
Sampuli ya uhakika hapo awali, hakikisha kuweka wima ya shimo la sampuli ya polypropylene acyl ni safi. Osha acrylamide isiyo na maji na maji ambayo yanaweza kuonekana chini ya shimo la sampuli. Maji yanaweza kufanya shimo la sampuli kuwa ndogo sana. Tumia sindano ya 25ml au 50ml na sindano ya chachi 18. Mimina kwenye buffer ya electrophoresis na toa kwa uangalifu shimo la sampuli.
· Inaweza kuwa ngumu kuona shimo la sampuli, lakini wakati huo huo, kilichobaki ni rahisi. Ikiwa kuna mashimo ya ziada, buffer ya mfano inaweza kupimwa na bluu ya bromophenol.